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對硝基酚是接觸硝基苯及含對硝基苯基化合物作業(yè)工人體內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物。尿中對硝基酚濃度的測定,被認為是生物學監(jiān)測和職業(yè)病診斷的重要指標。尿中對硝基酚的測定方法有比色法、氣相色譜法及液相色譜法等。比色法操作煩瑣、靈敏度差;氣相色譜法雖然靈敏度高、選擇性好,但是需要將對硝基酚衍生、操作復雜、不適于大批樣品分析;近年來開展環(huán)境樣品和尿液樣品中對硝基酚檢測主要使用HPLC方法,但是由于尿液中雜質(zhì)干擾多,導致凈化不好,干擾多,需要增加凈化步驟。
方法優(yōu)勢:
迪馬科技開發(fā)的《尿液中對硝基酚的檢測》,采用固相萃取-液相色譜法測定人尿中的對硝基酚,以濃鹽酸作為提取液,采用ProElut PXL 和ProElut Al-N固相萃取柱凈化樣品,通過HPLC檢測;方法定量限是0.1 mg/kg。本方案前處理步驟簡單、凈化效果好,基質(zhì)效應(yīng)小且檢測時間短;準確度高,重現(xiàn)性好。
以下為詳細解決方案,敬請參考!
尿液中對硝基酚的檢測——HPLC法
1、適用范圍
本方案適用于尿液中對硝基酚的檢測,本方法定量限0.1 mg/kg。
2、提取
取10 g樣品,加入2 mL濃鹽酸,沸水浴60 min,冷卻至室溫;
加入25 mL乙酸乙酯振蕩2 min,6000 rpm離心2 min;
取出上清液在40 ℃水浴條件下,減壓蒸至近干,再加入3 mL 50%甲醇水混勻,待凈化。
3、凈化—— ProElut Al-N 1 g/6 mL (Cat#:65306)上層
ProElut PXL 3 mL(Cat#:65920)下層
a活 化: | 加入5 mL甲醇、5 mL 50%甲醇水,流出液棄去; |
b上 樣: | 將待凈化液加入小柱,流出液棄去; |
c淋 洗: | 加入5 mL 50%甲醇水淋洗小柱,流出液棄去,棄去上層小柱,再用3 mL 50%甲醇水淋洗下層小柱,流出液棄去; |
d洗 脫: | 加入3 mL甲醇,收集洗脫液; |
e重新溶解: | 將洗脫液在40 ℃下減壓蒸至近干,1 mL水溶解殘渣,過微孔濾膜供HPLC分析。 |
4、色譜條件
色譜柱:Diamonsil C18(2),250 mm × 4.6 mm,5 μm(Cat#:99603)
流 速:1.0 mL/min 進樣量:20 μL 柱 溫:30 ℃
檢測器:UV 360 nm
流動相: A:0.1%甲酸水 B:甲醇 A:B=60:40
5、添加回收結(jié)果
人尿中對硝基酚的HPLC檢測添加回收結(jié)果
分析物 | 添加水平(mg/kg) | 回收率(%) |
對硝基酚 | 0.1 | 82.30 |
0.5 | 81.69 |
對硝基酚標準品(1.0 mg/L)液相色譜圖
對硝基酚標準品(5.0 mg/L)液相色譜圖
添加水平為0.1 mg/kg人尿中對硝基酚檢測的液相色譜圖
添加水平為0.5 mg/kg人尿中對硝基酚檢測的液相色譜圖
人尿中對硝基酚檢測(空白樣品)的液相色譜圖
尿液中對硝基酚的檢測——HPLC法相關(guān)產(chǎn)品信息:
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
樣品前處理 | ||
65306 | ProElut AL-N | 1 g/6 mL 30/pk |
65920 | ProElut PXL | 3mL 50/pk |
244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取裝置 | 12位 |
4803 | 1,3,6mL柱管通用連接器 | 15/pk |
4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
99011 | 真空/正壓兩用泵,無油 | 1/pk |
99013 | 抽濾瓶套裝 (包括硅橡膠管2米,2L抽濾瓶及橡膠塞) | 1/pk |
30039 | FitMax針頭式過濾器 Nylon | 13 mm,0.22 μm 100/pk |
30040 | FitMax針頭式過濾器 Nylon | 13 mm,0.45 μm 100/pk |
標準品 | ||
12-N-10855-5G | 對硝基酚[100-02-7] | 5 g |
色譜柱及保護柱 | ||
99603 | Diamonsil C18(2) 通用型反相色譜柱 | 250 × 4.6 mm,5 μm |
6201 | EasyGuard C18 保護柱 | 10 × 4.0 mm 1/pk 2個柱芯+1個柱套 |
HPLC溶劑?緩沖鹽?離子對試劑 | ||
50102 | 甲醇 HPLC級 | 4 L |
50104 | 乙酸乙酯 HPLC級 | 4 L |
50144 | 甲酸 HPLC級 | 50 mL |
通用色譜產(chǎn)品 | ||
52401B | 瓶架/藍色(現(xiàn)貨) | 50孔 |
52401A | 瓶架/白色(現(xiàn)貨) | 50孔 |
1034 | 樣品瓶(棕色/螺紋) | 2 mL, 100/pk |
1035 | 樣品瓶蓋/含墊(已經(jīng)組裝) | 100/pk |
H80465 | HPLC 進樣針 | 25 μL |
紅色產(chǎn)品貨號#30039、#30040、#1034、#1035*
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